登革热病毒ELISA诊断试剂

登革热病毒是一种直径约50nm的单链RNA病毒，属于黄病毒属。登革热和登革热出血热由四种密切相关但抗原不同的病毒血清型（DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4）之一引起。感染其中一种血清型不会提供交叉保护性*，因此生活在登革热流行区的人一生中可能会感染四次登革热。这些病毒是由埃及伊蚊传播的，埃及伊蚊是一种喜欢以人类为食的间活动的居家叮咬蚊子。代理商：广州华南生物工程有限公司感染登革热病毒会产生一系列临床疾病。从非特异性病毒综合征到严重和致命的出血性疾病。它主要是热带地区的一种疾病；其**分布与疟疾相当，估计有25亿人生活在有传染病风险的地区**估计有5000万至1亿例登革热病例和几十万例登革出血热病例。
（1）在大多数国家，DHF的病死率约为5%；大多数致命病例发生在儿童和年轻人中。
（2）DHF的重要危险因素包括感染病毒的毒株和血清型，以及患者的年龄、*状态和遗传倾向。
（3）风险群体：热带城市地区的居民或游客。
【检测原理】
特异性抗体的定性*酶学测定是基于ELISA（酶联*吸附试验）技术。微孔板上包被特定的抗原，以结合样品的相应抗体。洗涤微孔以去除所有未结合的样品材料后，添加酶联物，与捕获的抗体结合。在*二个洗涤步骤中，未结合的共轭物被去除。通过加入四甲基联苯胺(TMB)底物，得到蓝色反应产物，可以观察到结合结合物形成的*复合物。该产品的强度与样品中特异性抗体的数量成正比。加入终止液以终止反应，蓝色变成了黄色。使用酶标仪器读取450/620nm处的吸光度。
【试剂盒组成】
1）微孔板 12x8
2）样品稀释液 1×100ml，pH 7.2 ± 0.2，即用型
3）终止液 1×15ml，即用型
4）洗涤浓缩液 20倍浓缩，1×50ml，pH 7.2 ± 0.2
5）酶联物 1×20ml，即用型
6）底物液 1×15ml，即用型
7）阳性质控 1×2ml，即用型
8）临界质控 1×3ml，即用型
9）阴性质控 1×2ml，即用型
10）封板纸 1x
11）使用说明书 1x
12）布局表 1x
【所需的材料和设备】（未提供）
1）酶标仪
2）37℃培养箱
3）手动或自动洗板装置
4）移液器：10和1000µL
5）涡旋混合器
6）蒸馏水
7）一次性试管

【储存条件】

试剂盒必须储存于2-8℃的环境中，打开的试剂在标签上规定的有效期内是稳定的。

实验所需器材但试剂盒不提供

1）可在450nm处读数的酶标仪

2）生物学或高纯度水

3）真空泵

4）洗板机

5）37℃无CO2的孵箱

6）1-10ul的单道移液器，50-200ul的单道和多道移液器。

7）聚丙烯试管

8）Parafilm封口膜

9）计时器

10） 旋涡混合器

样品的采集与准备

1）此实验必须用血清来做。全血和血浆样本不能直接检测。

2）不要将不同批次的试剂混乱

3）不要加热热灭活的试验血清

4）实验前将所有试剂平衡至室温，温度的改变会对试验有影响

5）避免反复冻融样品血清

6）直接用干净的枪头从试剂瓶中移去试剂，不能转移，避免污染

7）不用的板条应立即放回至密封袋中保存

8）不要使用任何过期的试剂

9）避免试剂暴露受热或阳光直射

10） 有些试剂可能会产生沉淀，使用**定要混匀

11） 洗涤过程不完整会对试验结果产生影响

12） 为了减少由于孵育时间的差异而引起的漂移，建议底物液和终止液加入的时间和速度要*

13） 避免试剂中有微生物污染，尤其是酶联物

14） 每一次吸取试剂，标准品，质控品时都应用干净的枪头